近日，美國巴爾的摩退伍軍人事務醫院和馬里蘭大學醫學院的Amit Golding等人在《Journal of Immunological Methods》雜志上發表文章，應用成像流式細胞術來鑒定轉錄因子Forkhead box O1（FOXO1）的細胞內定位。

作者首先建立了一個模型系統來監控人淋巴瘤細胞系HuT102中的FOXO1。通過傳統的細胞組分分離和Western blott方法，作者發現這個模型能夠檢測到FOXO1的定位。在細胞未經處理時，它主要位于細胞核中。之后利用佛波酯/離子霉素（PMA/I）處理，FOXO1的表達逐漸轉移到細胞質。而Akt VII抑制劑的處理可逆轉這種作用。

然而，這種方法的每個條件都至少需要3x106個細胞，才能準確了解蛋白定位，并且它本身無法解析異質性的細胞群。考慮到這些限制，作者認為成像流式細胞術可能是一種更好的替代方法。

在此，他們利用Amnis Imagestream Mark II成像流式細胞儀（默克公司）和40倍物鏡來收集每個樣品的10，000個細胞數據。他們利用活細胞/死細胞染料來分離活細胞，利用DAPI來鑒定細胞核，并利用CD4受體檢測抗體以及細胞內染色來確定FOXO1的定位。

作者通過計算皮爾森相關系數，利用DAPI和FOXO1的信號來產生相似性得分，表明FOXO1主要定位在細胞核。這一基線建立后，作者開展PMA/I處理、AKT VII抑制劑處理或兩者疊加處理，并再次鑒定FOXO1的定位。然后利用人外周血單核細胞來觀察PMA/I處理對CD4和CD8細胞群的作用。

總之，這些結果表明成像流式細胞術是確定FOXO1定位的可靠系統。與其他成熟方法相比，它需要的細胞量比較少，并且能夠在單細胞亞群中定位FOXO1的表達。這對于淋巴細胞減少癥的患者來說至關重要。此外，這種技術可在384孔/1536孔板中實現許多高通量的應用。

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